lisa实验检测：十种样本收集储存及处理办法
LISA 实验的样本种类很多，有血清，血浆，细胞上清，细胞裂解液，尿液，关节滑液，脑脊液，肺泡灌洗液，各种组织的组织匀浆；采集和处理的方式都不相同,为了使客户更加了解Elisa试剂盒样本收集，我司结合公司实际，将 收集的各类样本的采集、处理和保存方式。方法大多出自文献和试剂盒说明书，部分方法经我司验证过，但有的方法并没有实际操作过，所以，以下方法仅供参考。
一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存；
1、 真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中；
2、 采血后室温静置1小时；
3、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
5、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的 ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。
二、ELISA实验中血浆的采集、处理和保存；
1、 真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中；
2、 按1:9加入抗凝剂（EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠），30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；
3、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心5min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
5、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求，建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。
注意事项：制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA,抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。
三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存；
1、 采集尿液样本500ul，加入无菌试管中；
2、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的样本留上清，弃下面沉淀。
3、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
4、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存；
1、采集脑脊液样本，加入无菌试管中；
2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的样本留上清，弃下面沉淀。
3、取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存；
1、采集细胞培养上清液500ul，加入无菌试管中；
2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
3、取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
六、ELISA 实验中细胞裂解液的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓度）
1、 取细胞培养板或细胞悬液，用PBS（PH7.2-7.4）洗涤细胞培养板1-2次。
2、 通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂（裂解液），使细胞破坏并放出细胞内成份。
3、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心20min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
5、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
七、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存；
1、 10%水合氯醛溶液，腹腔麻醉。
2、 打开腹腔，另取10ml注射器行下腔静脉采血，尽可能将血放尽。
3、 在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml，分三次灌洗：2ml、1.5ml、1.5ml灌洗。回收率在70%以上。
4、 将肺泡灌洗液用离心机4℃，1500rpm离心10min。
5、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
6、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
八、ELISA 实验中关节滑液的采集、处理和保存；
1、 口腔关节：患者取坐位，常规消毒后，作皮下及关节后区局部浸润麻醉。然后嘱患者大张口，采用装有2ml生理盐水的注射器（5号针头）作关节上腔 穿刺，髁后进针，针尖方向斜向前、内、上，抵达关节结节后斜面后稍后退，回抽如发现有淡黄色液体，即表明已进入关节上腔，注入2ml生理盐水，反复注入、 回抽五次。
膝骨关节滑液：无菌穿刺取得关节液。
2、 将关节液用离心机4℃，1500rpm离心15min，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
3、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
4、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
九、 ELISA实验中各类组织匀浆（容易匀浆的组织）的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓度）
1、 采集组织，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，剔除附属的结缔组织，称取组织块。
2、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织 的小烧杯放入冰水中）。
3、 匀浆的方式有多种：
a) 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
b) 机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
4、 将制备好的10％匀浆用离心机4℃，3000rpm离心15min，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
5、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
6、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
十、ELISA实验中各类组织匀浆（不易匀浆的组织）的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓度）
7、 采集组织，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，剔除附属的结缔组织，称取组织块。
8、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织 的小烧杯放入冰水中）。
9、 匀浆的方式有多种：
a) 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
b) 机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
c) 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
10、 将制备好的10％匀浆用离心机4℃，3000rpm离心15min，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
11、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
12、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
上海梵态生物建议：
1、 只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
2、 实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
3、 若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。
4、 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致 ELISA实验结果偏差。
5、 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素 较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。
6、 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。
7、 建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。
