Elisa试剂盒实验常见问题分析Elisa试剂盒实验常见问题分析 1、ELISA试剂盒试验出现非常弱的结果，常见有7种原因，其解决方法如下： 1)可能原因：温育的时间或者温度不够； 解决方法：校正温育箱温度。 2)可能原因：显色反应时间太短； 解决方法：校正定时钟准确定时。 3)可能原因：所用配制缓冲液的蒸馏水有问题； 解决方法：使用新鲜合格的蒸馏水。 4)可能原因：加入/酶的稀释液浓度太低； 解决方法：按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。 5)可能原因：酶标仪滤光片不正确； 解决方法：检查酶标仪使用的滤光片。 6)可能原因：试剂盒没有充分平衡； 解决方法：试剂室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温。 7)可能原因：不正确的试剂储存方式； 解决方法：按照说明书要求保存试剂盒。
2、ELisa试剂盒试验的标准曲线和测定的重复性差，这是什么原因造成的？ 答：试验的标准曲线和测定的重复性差，这是典型的由测定操作引起的问题，常见原因如下： a)可能原因：加样本及试剂量不准；孔间不一致； 解决方法：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。 重复某一样品时，加样时间尽可能与次接近； 重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性； 样品稀释前应充分混匀。 b)可能原因：加样过快，孔间发生污染； 解决方法：重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；加样不要过快。 c)可能原因：加错样本； 解决方法：检查记录和试剂，是否加错样本。 d)可能原因：加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区； 解决方法：加样枪头不要贴壁。 e)可能原因：不同批号试剂盒中组分混用； 解决方法：不同批号试剂盒中组分不可混用。 f)可能原因：温育时间、洗板、显色时间不一致； 解决方法：检查时间是否一致。 g)可能原因：孔内污染杂物； 解决方法：离心样品，排除杂物。 h)可能原因：试剂/样品没有混匀； 解决方法：充分混匀样品和试剂。 i)可能原因：血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血 细胞，易出现假阳性反应等。 解决方法：待血清标本完全凝固后做试验。 3、 试验结果白板，而且阳性对照不显色，应如何分析和查找原因？ 答：试验结果白板，而且阳性对照不显色，常见原因如下： a)可能原因：漏加或者误加试剂； 解决方法：检查试验记录和剩余试剂。每次加液前均应核对标签。 b)可能原因：试剂过期； 解决方法：使用有效期内的产品。 c)可能原因：洗板液配制中出现问题，如量筒不干净含HRP酶抑制物（叠氮钠 等）； 解决方法：使用干净的器皿，正确配制试剂。 d)可能原因：温育的时间或温度不够； 解决方法：校正温育箱温度。 e)可能原因：标准品失活或者丢失； 解决方法：标准品正确保存、溶解和混匀。 f)可能原因：失活或者丢失； 解决方法：更换或者提高浓度 g)可能原因：酶失活或者丢失 检查方法：把工作浓度的酶再稀释20－100倍，取5uL加入50ul的显色底物，终止后显色是否能达到1.0左右，此为酶的粗略估计。 解决方法：更换酶或者提高酶的浓度。 h)可能原因：显色底物失活 检查方法：加少量的工作浓度的酶，TMB是否很快显色。 解决办法：更换显色底物.
4. Elisa试剂盒试验结果空白背景高，这是什么原因造成的？ 答：试验结果空白背景高，常见原因如下： a)可能原因：洗板不干净； 解决方法：充分洗涤，彻底拍干；洗板要防止交叉污染；浓缩洗液准确配制；吸嘴尽可能一次性使用；加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。 b)可能原因：显色液变质或者试剂过期； 解决方法：检查试剂盒有效期。 c)可能原因：试剂稀释有误，如加酶的浓度过高； 解决方法：请按说明书所示稀释倍数配制； d)可能原因：蒸馏水受酶等污染； 解决方法：使用新鲜蒸馏水； e)可能原因：试剂混用； 解决方法：不同批号试剂勿混用。 f)可能原因：培养箱温度超过37℃或反应时间过长。 解决方法：显色反应时间适当缩短。 |
